fbpx
 
Descarca aplicatia REPORTERIS
 
GENOTIPARE HPV (HUMAN PAPILLOMA VIRUS). Biochimist Ștefania Brebu

GENOTIPARE HPV (HUMAN PAPILLOMA VIRUS). Biochimist Ștefania Brebu


Papilomavirusul uman (HPV) poate provoca o varietate de boli de piele și mucoase. Infecția apare atunci când particulele virale ajung la celulele bazale expuse, de cele mai multe ori prin micro traumă în epiteliu.

Prezintă tropism de către celulele stem din diferite epitelii mucoase și cutanate, ale căror diferențe influențează modelul de expresie genetică a virusului.

Până în prezent, aproximativ 218 tipuri de HPV au fost izolate și identificate, iar dintre acestea 45 infectează tractul genital, în timp ce celelalte pot provoca boli ale pielii. HPV-urile α produc leziuni vizibile clinic pe membranele mucoase și pe piele, în timp ce HPV-urile β și ɣ sunt în principal responsabile de leziuni cutanate subclinice persistente secundare infecțiilor dobândite la începutul copilariei.

Subtipurile urogenitale sunt împărțite în două categorii: cele cu potențial de risc oncogen scăzut (Low-Risk Group) și cele cu potențial de risc oncogen mediu-mare (High-Risk Group)[1].

Subtipurile cu risc ridicat sunt asociate cu apariția unui grad înalt de leziuni pre canceroase și a cancerului, în timp ce subtipurile cu risc scăzut sunt frecvent asimptomatice sau benigne.

HPV conține o moleculă de ADN dublu catenar cu un genom circular, de aproximativ 8 Kb. Trei regiuni pot fi observate: o regiune care reglează transcripția și replicarea (URR), o regiune a genei pentru expresie ce codifică proteine implicate în transcripție, transformare si replicare (E1 E2 E5 E6 E7) și o regiune a genei pentru expresie “târzie” ce codifică proteine structurale (L1 L2 L4)[2,3].

În cadrul INVESTIGAȚII MEDICALE PRAXIS se efectuează detecția a celor 37 de subtipuri HPV.

  1. PRINCIPIUL METODEI

Testul combină PCR pentru HPV pentru cele 37 de subtipuri: risc mediu-înalt: 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 69, 73 și 82; risc scăzut: 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 67, 70, 71, 72, 74, 81, 83, 84 și. 91. Procedura pentru HIGH+LOW PAPILLOMASTRIP KIT constă în 3 etape:

a) Extracția ADN;

b) Amplificarea PCR;

Kit-ul High+Low PapillomaStrip include toți reactivii necesari pentru amplificarea regiunilor E6-E7 din cele 37 subtipuri de HPV detectate de kit. Deoarece expresia genelor E6- E7 este direct asociată cu carcinogeneza, această regiune a fost selectată deoarece detectarea țintelor poate oferi informații semnificative biologice și patologice. Unele studii arată existența unei gene cu o deleție în regiunea L1 care apare atunci când HPV-ul cu risc înalt se integrează în regiunile epiteliale, fenomen întâlnit la aproximativ 30% din cazurile de col uterin pozitive pentru regiunea E6 (6). În timpul PCR-ului are loc și amplificarea unei gene de control (GADPH sau β-globină).

c) Hibridizarea;

În această etapă există o legare specifică a fragmentelor de ADN amplificate în timpul reacției PCR la o serie de sonde depuse pe membrane. Sondele pentru fiecare subtip HPV detectat sunt legate covalent de membrană împreună cu o sondă pentru controlul amplificării, o sondă pentru controlul de dezvoltare și două sau trei linii, unul negru și unul sau două roșii pentru a controla poziționarea benzii și ca ajutor în interpretarea rezultatelor.

Detectarea fragmentelor hibridizate cu diferite sonde este realizată cu ajutorul unui conjurat (streptavidin -peroxidază) care se leagă la biotină, ce a fost adăugată fragmentelor de ADN în timpul amplificării PCR. Se adaugă un substrat pentru peroxidază (TMB) ce va precipita și determina colorarea membranei în albastru în cazul în care a avut loc hibridizarea.

 

  1. INTERPRETAREA REZULTATELOR

Benzile obtinute pe fiecare strip sunt interpretate cu ajutorul a două șabloane, unul pentru HPV din grupa mediu-risc înalt și unul pentru HPV din grupa cu risc scăzut. Fiecare strip trebuie să prezinte o linie albastră în dreptul controlului de developare ceea ce reprezintă ca reacțiile de hibridizare și developare au funcționat.

Algoritm de intepretare:

  • Doar banda de control (β-globină): nici unul din subtipurile HPV ce ar putea fi detectate cu acest kit nu este prezent în proba analizată;
  • Banda de control și o bandă corespunzătoare unui subtip HPV: pacientul este pozitiv pentru respectivul subtip;
  • Banda de control și mai multe benzi corespunzătoare pentru diferite subtipuri de HPV: pacientul are multiple subtipuri HPV
  • Unul sau mai multe benzi corespunzătoare pentru diferite subtipuri de HPV: pacientul este pozitiv pentru HPV, deși β-globină nu s-a amplificat. Acest lucru este posibil atunci când proba are un număr mare de copii pentru unul sau mai multe subtipuri, amplificarea PCR fiind creată să favorizeze amplificarea HPV în defavoarea controlului intern;
  • Lipsa benzilor pentru β-globină și HPV: Eșec de amplificare- se repetă amplificarea și în cazul în care se repetă același rezultat este nevoie de o nouă recoltare a probei [5,6].

BIBLIOGRAFIE

  1. https://medlineplus.gov/hpv.html
  2. Dunne, E. F., & Park, I. U. (2013). HPV and HPV-Associated Diseases. Infectious Disease Clinics of North America, 27(4), 765–778. doi:10.1016/j.idc.2013.09.001
  3. Magalhães, G. M., Vieira, É. C., Garcia, L. C., De Carvalho-Leite, M. de L. R., Guedes, A. C. M., & Araújo, M. G. (2021). Update on human papilloma virus - part I: epidemiology, pathogenesis, and clinical spectrum. Anais Brasileiros de Dermatologia, 96(1), 1–16. doi:10.1016/j.abd.2020.11.003
  4. Mattoscio, D., Medda, A., & Chiocca, S. (2018). Human Papilloma Virus and Autophagy. International Journal of Molecular Sciences, 19(6), 1775. doi:10.3390/ijms19061775
  5. https://operon.es/wp-content/uploads/pdf/09051010_HIGH+LOW%20HPV_web.pdf
  6. Bradbury M, Xercavins N, García-Jiménez Á, Pérez-Benavente A, Franco-Camps S, Cabrera S, Sánchez[1]Iglesias JL, De La Torre J, Díaz-Feijoo B, Gil-Moreno A, Centeno-Mediavilla C. Vaginal Intraepithelial Neoplasia: Clinical Presentation, Management, and Outcomes in Relation to HIV Infection Status. J Low Genit Tract Dis. 2019 Jan;23(1):7-12.

 
Citeste si...
Nota
(0 voturi)
Donație singulară
Donează suma dorită pentru susținerea proiectului ReporterIS
Suma: 

Donație lunara
Donează lunar pentru susținerea proiectului ReporterIS
Suma: 

Donație singulară
Donează suma dorită pentru susținerea proiectului ReporterIS
Suma: 

Donație lunara
Donează lunar pentru susținerea proiectului ReporterIS
Suma: 

Arhiva ReporterIS

« August 2022 »
Lu Ma Mie Jo Vi Sa Du
1 2 3 4 5 6 7
8 9 10 11 12 13 14
15 16 17 18 19 20 21
22 23 24 25 26 27 28
29 30 31        

Cartierul Austriac